博进生物｜填料选择攻略!
当纯化领域的初学者在选择填料时，往往会面对市面各家填料名称各不相同，种类也有很大区别的难题。填料种类的选型，粒径的选择，孔径的变化，配基的选择……更是让人无从下手。那么，今天就让我们跟随博进填料选择攻略，一起来看看博进填料的选择方法吧！
Step1 了解目标分子的理化性质
首先可以通过查阅文献、资料等方式了解目标分子的性质，比如等电点，分子大小；其次可以询问上游的同事或者老师，料液的来源，是否带有标签，是处于粗纯阶段还是精纯阶段；最后还可以通过稳定性实验确定目标分子的稳定区间。
Step2 选择填料的种类
了解完以上性质后，可以开始选择填料种类啦。如果是抗体或者标签蛋白，首先考虑亲和层析填料，亲和层析填料特异性高，一步纯化纯度较高；如果目标分子不是抗体又不携带标签，那么就要优先考虑离子层析填料了，离子层析适用范围广，价格便宜；最后考虑的是疏水层析填料，但是在两种情况下会优先考虑疏水层析，一种是硫酸铵沉淀后，另一种是用结合/洗脱模式的离子层析纯化后。这两种情况溶液盐浓度较高，疏水可直接上样，在提高纯度的同时还可以降低溶液中的盐浓度。
亲和层析填料
生物分子之间存在很多特异性的相互作用，如抗原与抗体、酶与底物、激素与受体、核酸中的互补链，多糖与蛋白复合体等，他们之间能够进行专一可逆的结合，这种结合力就称为亲和力。亲和层析的方法就是根据这种具有亲和力的生物分子间可逆结合和解离的原理建立和发展起来的。
亲和层析原理
亲和层析适用范围
离子层析填料
离子层析填料主要是依赖电荷间的相互作用，利用带电分子中电荷的微小差异进行分离。当目标分子等电点大于溶液pH时，选择阳离子层析填料进行结合/洗脱模式纯化；反之，当目标分子等电点小于溶液pH时，选择阴离子层析填料进行结合/洗脱模式纯化。
疏水层析填料
蛋白分子的表面疏水性是不易判断的，在选择疏水层析填料时可以通过查阅相关文献资料来进行初步的填料筛选，或者直接选择博进预装柱来做填料筛选实验。博进可根据用户需求提供1ml/5ml/11ml预装柱试用。
填料疏水性增强
部分离子的Hofmeister序列
Step3 选择填料粒径
填料的粒径要根据纯化的目的和料液的特性来选择。作为第一步捕获阶段，料液杂质含量多且相对粘稠的情况下选择大粒径纯化填料（如博进70 μm系列填料）；如果是精纯阶段，追求更高的分辨率，可以选择小粒径纯化填料（如博进40 μm系列填料）。
Step4 选择填料的孔径
粒径选择完成之后，最后就该选择填料的孔径了。博进的填料根据分子的分子量大小设计了三个不同系列孔径的填料。分子量<200 KDa优先考虑HP系列填料（孔径30 nm），分子量在100-300 KDa，选择CP系列（孔径100 nm），分子量>150 KDa推荐选择GP系列（有500/1000 nm两种孔径可供选择）。
苏州博进生物技术有限公司由瞿欢欢博士创建于2013年，致力于突破生物制药下游领域“卡脖子”关键技术，为用户提供分离纯化专业解决方案，包括高品质的层析填料和纯化工艺技术服务。博进生物坚持把科技创新作为公司发展的战略支撑，累计拥有26项授权发明专利，公司以苏州为总部基地，在北京设有创新研究院，在泰州建有产业化基地，核心产品包括离子/疏水/亲和等三大系列硬胶填料，可满足病毒/疫苗、单抗/重组蛋白以及质粒/核酸等生物制品大规模纯化的技术需求。
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