HPDEAE-60弱阴离子交换介质
HPDEAE-60弱阴离子交换介质
1. 产品简介
离子交换层析是生物大分子分离纯化最常用的方法。博进生物开发的 HPDEAE-60 弱阴离子交换介质以具有刚性结构的聚甲基丙烯酸酯微球作为基质，采用特有的表面修饰技术大幅提高聚合物基质的亲水性，具有高分辨率、低非特异性吸附以及优良的生物相容性等优点。设计孔径广泛适用于除多肽、病毒外，大部分抗体和重组蛋白的纯化。
2. 产品特性
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参数 |
技术指标 |
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粒径范围 |
70±20μm |
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孔径 |
30nm |
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基质 |
聚甲基丙烯酸酯 |
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功能基 |
DEAE (-(CH2)2N(C2H5)2) |
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功能基类型 |
弱碱 |
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动态载量 |
≥20 mg BSA/ml wet gel |
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耐压上限 |
1 MPa |
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pH 稳定性 |
3~ 13（长时间）；2~ 14（短时间） |
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保存 |
4~30℃（20%乙醇） |
3. 应用
HPDEAE-60 弱阴离子交换介质广泛用于重组蛋白、血液制品、酶、多糖、核酸等的层析分离。层析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、再生等步骤。
平衡：用 5~ 10CV 的平衡缓冲液（如 20 mM PB ，pH7.0 ，具体的缓冲体系应根据目标蛋白的稳定性和等电点进行筛选和优化）以不高于上限压力的流速平衡离子交换柱，至流出液电导和 pH 不变（与平衡液一致）。
上样：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致，固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐；高浓度样品溶液可用平衡液稀 释。为了避免堵塞层析柱，样品溶液应经离心或微滤（0.45μm）处理。上样量根据介质的载量和样品溶液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样结束后继续用平衡缓冲液淋洗，直至紫外下降至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（如 20 mM PB+1M NaCl ，pH7.0）洗脱，洗脱方式可采用 pH 梯度洗脱、线性梯度洗脱或阶梯式梯度洗脱，收集流出液。
再生：每次层析之后可用 1-2M NaCl 清洗层析柱，除去强结合的蛋白。
原位清洗：介质使用 5- 10 次（具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行原位清洗：
（1）对于通过离子键强结合的蛋白，可用 2M NaCl 清洗 3~4CV；
（2）对沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白、脂蛋白，可用1M NaOH 冲洗3~4CV；
（3）对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 70%乙醇或 30%异丙醇以不高于上限压力的流速冲洗 3~4CV（使用高浓度的有机溶剂时，为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法）。
保存：4~30℃ 储存于 20%乙醇中；层析柱中的介质可用 20%的乙醇冲洗后保存于4~30℃。
其他注意事项：在使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干或密封不严，防止气泡进入。
