肝素亲和层析介质
肝素亲和层析介质
1. 产品简介
肝素（Heparin）是一种含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III 、凝血酶、 类凝血酶、人凝血因子IX 、XI和VIII ，也能和大肠杆菌表达的人白介素、人前列腺 生长因子、重组人血管内皮生长因子、软骨生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组肝细胞生长因子、重组鼠肝素辅因子 II 、重组人血小板第四因子、重组人内皮抑素、重组人角质细胞生长因子等生物大分子结合，所以肝素亲和层析介质可以用于这类物质的纯化。
2. 产品特性
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参数 |
指标 |
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平均粒径 |
90 μm±20μm |
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基质 |
琼脂糖凝胶微球 |
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配基 |
肝素 |
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动态载量 |
≥15mg LF/ml wet gel |
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最大耐压 |
0.3 MPa |
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pH 稳定性 |
4~ 12（长时间）；4~ 13（短时间） |
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保存 |
2~ 10 ℃（0.05M 乙酸钠+20%乙醇） |
3. 应用
肝素亲和层析介质广泛用于抗凝血因子 III 、凝血酶、类凝血酶、人凝血因子 IX 、XI 和 VIII 等生物大分子的分离纯化。层析操作通常包括装柱、平衡、上样、淋洗、洗脱、原位清洗等步骤。
平衡：用 5~ 10CV 的平衡缓冲液（20-50mM PB 或 Tris-HCl ，pH 7.4-8.0 ，可加入 0. 15M NaCl 抑制非特异吸附）平衡层析柱，至流出液电导和 pH 不变（与平衡液一致）。
上样：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（20-50mM PB 或 Tris-HCl+1-2M NaCl ，pH7.4-8.0 ，NaCl 浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整）洗脱，收集流出液。可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。
原位清洗：为了避免不同样品间的相互干扰，或者当介质污染比较严重时（反压增加），需要对介质进行在位清洗。
（1） 对于以离子键结合的蛋白，可用 2~3 CV 以上的 2M NaCl 清洗，并用 3CV 以上的纯水冲洗。
（2） 对沉淀或变性蛋白蛋白，可用 0. 1M NaOH 清洗（1~2h），并用 3~ 10 CV平衡液和 3 CV 以上的纯水冲洗。也可用 6M 盐酸胍或 8M 尿素清洗（0.5~ 1h）。
（3） 对疏水性结合的蛋白，可用 0.1~0.5%的非离子去污剂清洗（1~2h），并用 3~ 10 CV 的纯水冲洗。
其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干，气泡进入。
