GPCM-60弱阳离子交换介质

GPCM弱阳离子交换介质产品说明书

1. 产品简介

离子交换层析是生物大分子分离纯化最常用的方法。博进生物开发的GPCM弱阳离子交换介质以具有刚性结构的聚甲基丙烯酸酯微球作为基质，采用特有的表面修饰技术大幅提高聚合物基质的亲水性，具有高分辨率、低非特异性吸附以及优良的生物相容性等优点。设计孔径广泛适用于除多肽、病毒外，大部分抗体和重组蛋白的纯化。

2. 产品特性

参数	技术指标
产品型号	GPCM
平均粒径	40 μm /70 μm
耐压上限	1MPa
基质	聚甲基丙烯酸酯
功能基	CM （—CH2COO-）
功能基类型	弱酸
动态载量	≥30 mg Lys/ml wet gel
pH稳定性	3~13（长时间）；2~14（短时间）
保存	4~30 ℃（20%乙醇）

 

3. 应用

GPCM弱阳离子交换介质专为重组蛋白的分离纯化而设计。其层析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、再生等步骤。

具体的操作方法如下（以1ml柱为例）：

平衡：用5~10CV的平衡缓冲液（Buffer A，如20 mM PB，pH7.0，具体的缓冲体系应根据目标蛋白的稳定性和等电点进行筛选和优化）以不高于上限压力的流速平衡离子交换柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。

上样：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致，固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。

淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。

洗脱：以洗脱缓冲液（20 mM PB+1M NaCl，pH7.0，也可采用pH梯度洗脱）洗脱（可采用线性梯度洗脱或阶越梯度洗脱），收集流出液。

再生：每次层析之后可用1-2M NaCl清洗层析柱，除去强结合的蛋白。

原位清洗：介质使用5-10次（具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行原位清洗：

1. 对于通过离子键强结合的蛋白，可用2M NaCl清洗3~4CV；
2. 对沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白、脂蛋白，可用1M NaOH冲洗3~4CV；
3. 对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用70%乙醇或30%异丙醇以不高于上限压力的流速冲洗3~4CV（使用高浓度的有机溶剂时，为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法）。

保存：4-30^oC下20%乙醇中保存（4^oC下有利于长期保存）；层析柱中的介质可用20%的乙醇冲洗后保存于4-30^oC。

其它注意事项：在使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干或密封不严，防止气泡进入。