GPB-60丁基疏水介质（高密度）

GP系列疏水层析介质产品说明书

1. 产品简介

疏水层析是利用蛋白质在高盐浓度下吸附在层析介质的疏水基团上，降低盐浓度时，不同蛋白按疏水性从弱到强依次被洗脱的原理达到分离纯化的目的。疏水层析操作条件温和、分辨率高，是生物大分子分离纯化最常用的方法之一。博进公司开发的 GP 系列疏水层析介质以高交联度聚丙烯酸酯微球为基质，以 Butyl、Octyl 、Phenyl 等为配基（疏水性依次增加），该介质保留了聚合物微球的高机械  强度，同时对生物活性大分子具有很好的相容性，特别适用于蛋白质、酶、多糖、核酸、质粒等的分离纯化。

2. 产品特性

3. 应用

疏水层析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、再生等步骤。具体的操作方法如下（以 7.5 cm 根1.6cm I.D. CV= 15ml 为例）：

平 衡 ： 用 5~ 10CV  的 平 衡 缓 冲 液 （Buffer  A ， 如 50  mM  PB+1.0~2.0  M(NH4)2SO4, pH7.0 ，具体的缓冲体系、盐的种类及浓度应根据目标蛋白的稳定性及疏水性、层析介质的疏水性进行筛选和优化）以 2-5ml/min 的流速平衡层析柱，至流出液电导和 pH 不变（与平衡液一致）。

上样：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐；高浓度样品溶液可用平衡液稀 释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。

淋洗：以 2-5ml/min 的流速上样，并继续用平衡缓冲液淋洗至基线。

洗脱：用洗脱缓冲液（Buffer B ，如 50 mM PB, pH7.0）洗脱（可采用线性梯度洗脱或阶越梯度洗脱），收集流出液。

再生：每次层析之后可用 3CV 低离子强度的缓冲液以 2-5ml/min 的流速再生层 析柱，除去疏水结合较强（可逆结合）的蛋白，然后依次用 3CV 的水冲洗，5CV的平衡缓冲液平衡。

在位清洗：介质使用 5- 10 次（具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行在位清洗，除去不可逆结合的蛋白和其它物质：

（1） 对沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白和脂蛋白，可用 1M NaOH 以 1-2ml/min的流速反向冲洗 3~4CV ，并立即用 3CV 的水冲洗，5CV 的平衡缓冲液平衡；

（2） 对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用 70%乙醇或 30%异丙醇反向冲洗 3~4CV（使用高浓度的有机溶剂时，为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法），并立即用 3CV 的水冲洗，5CV 的平衡缓冲液平衡。

保存：4-30℃储存于 20%乙醇中；层析柱中的介质可用 20%的乙醇冲洗后保存于 4-30℃。