HPB-30丁基疏水介质（低密度）
HP系列疏水层析介质产品说明书
1. 产品简介
疏水层析是利用蛋白质在高盐浓度下吸附在层析介质的疏水基团上，降低盐浓度时，不同蛋白按疏水性从弱到强依次被洗脱，从而达到分离纯化的目的。疏水层析操作条件温和、分辨率高，是生物大分子分离纯化最常用的方法之一。博进公司开发的HP系列疏水层析介质以高交联度聚丙烯酸酯微球为基质，以Butyl、Octyl、Phenyl等为配基（疏水性依次增加），该介质保留了聚合物微球的高机械强度，同时对生物活性大分子具有很好的相容性，特别适用于蛋白质、酶、多糖、核酸、质粒等的分离纯化。
2. 产品特性
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参数 |
指标 |
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基质 |
高交联度聚丙烯酸酯微球 |
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平均粒径 |
70±10μm |
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功能基及配基密度 |
Butyl |
30 μmol/ml wet gel |
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Octyl |
5 μmol/ml wet gel |
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Phenyl |
20 μmol/ml wet gel |
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最高流速（25℃） |
1000 cm/h |
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最高耐压 |
1 MPa (10 bar) |
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pH稳定性 |
2~13（长时间）；1~14（短时间） |
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化学稳定性 |
室温下1M NaOH、0.01M HCl、6M盐酸胍、8M脲浸泡7天，性能无明显变化 |
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物理稳定性 |
溶液的pH或离子强度影响介质的体积变化率<0.1% |
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保存 |
4~30 ℃（20%乙醇） |
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3. 应用
疏水层析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、再生等步骤。具体的操作方法如下（以20cm ´1.6cm I.D., H=7.5cm, CV=15ml为例）：
平衡：用5~10CV的平衡缓冲液（Buffer A，如50 mM PB+1.0~2.0 M (NH4)2SO4, pH7.0，具体的缓冲体系、盐的种类及浓度应根据目标蛋白的稳定性及疏水性、层析介质的疏水性进行筛选和优化）以2-5ml/min的流速平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。
上样：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗：以2-5ml/min的流速上样，并继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱：用洗脱缓冲液（Buffer B，如50 mM PB, pH7.0）洗脱（可采用线性梯度洗脱或阶越梯度洗脱），收集流出液。
再生：每次层析之后可用3CV低离子强度的缓冲液以2-5ml/min的流速再生层析柱，除去疏水结合较强（可逆结合）的蛋白，然后依次用3CV 的水冲洗，5CV的平衡缓冲液平衡。
在位清洗：介质使用5-10次（具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行在位清洗，除去不可逆结合的蛋白和其它物质：
（1）对沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白和脂蛋白，可用1M NaOH以1-2ml/min的流速反向冲洗3~4CV，并立即用3CV 的水冲洗，5CV的平衡缓冲液平衡；
（2）对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用70%乙醇或30%异丙醇反向冲洗3~4CV（使用高浓度的有机溶剂时，为了避免产生气泡，应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法），并立即用3CV 的水冲洗，5CV的平衡缓冲液平衡。
保存：4-30oC下20%乙醇中保存（4oC下有利于长期保存）；层析柱中的介质可用20%的乙醇冲洗后保存于4-30oC。
