HPB-30丁基疏水介质(高密度)
HP系列疏水层析介质产品说明书
1. 产品简介
疏水层析是利用蛋白质在高盐浓度下吸附在层析介质的疏水基团上,降低盐浓度时,不同蛋白按疏水性从弱到强依次被洗脱,从而达到分离纯化的目的。疏水层析操作条件温和、分辨率高,是生物大分子分离纯化最常用的方法之一。博进公司开发的HP系列疏水层析介质以高交联度聚丙烯酸酯微球为基质,以Butyl、Octyl、Phenyl等为配基(疏水性依次增加),该介质保留了聚合物微球的高机械强度,同时对生物活性大分子具有很好的相容性,特别适用于蛋白质、酶、多糖、核酸、质粒等的分离纯化。
2. 产品特性
参数 |
指标 |
|
基质 |
高交联度聚丙烯酸酯微球 |
|
平均粒径 |
70±10μm |
|
功能基及配基密度 |
Butyl |
30 μmol/ml wet gel |
Octyl |
5 μmol/ml wet gel |
|
Phenyl |
20 μmol/ml wet gel |
|
最高流速(25℃) |
1000 cm/h |
|
最高耐压 |
1 MPa (10 bar) |
|
pH稳定性 |
2~13(长时间);1~14(短时间) |
|
化学稳定性 |
室温下1M NaOH、0.01M HCl、6M盐酸胍、8M脲浸泡7天,性能无明显变化 |
|
物理稳定性 |
溶液的pH或离子强度影响介质的体积变化率<0.1% |
|
保存 |
4~30 ℃(20%乙醇) |
3. 应用
疏水层析操作通常包括平衡、上样、淋洗、洗脱、再生等步骤。具体的操作方法如下(以20cm ´1.6cm I.D., H=7.5cm, CV=15ml为例):
平衡:用5~10CV的平衡缓冲液(Buffer A,如50 mM PB+1.0~2.0 M (NH4)2SO4, pH7.0,具体的缓冲体系、盐的种类及浓度应根据目标蛋白的稳定性及疏水性、层析介质的疏水性进行筛选和优化)以2-5ml/min的流速平衡层析柱,至流出液电导和pH不变(与平衡液一致)。
上样:样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制;低浓度样品溶液可用平衡液透析或添加相应量的盐;高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱,样品应经离心或微滤(0.45μm)处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。
淋洗:以2-5ml/min的流速上样,并继续用平衡缓冲液淋洗至基线。
洗脱:用洗脱缓冲液(Buffer B,如50 mM PB, pH7.0)洗脱(可采用线性梯度洗脱或阶越梯度洗脱),收集流出液。
再生:每次层析之后可用3CV低离子强度的缓冲液以2-5ml/min的流速再生层析柱,除去疏水结合较强(可逆结合)的蛋白,然后依次用3CV 的水冲洗,5CV的平衡缓冲液平衡。
在位清洗:介质使用5-10次(具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关)后,需要对介质进行在位清洗,除去不可逆结合的蛋白和其它物质:
(1)对沉淀蛋白、疏水性结合的蛋白和脂蛋白,可用1M NaOH以1-2ml/min的流速反向冲洗3~4CV,并立即用3CV 的水冲洗,5CV的平衡缓冲液平衡;
(2)对强疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质,可用70%乙醇或30%异丙醇反向冲洗3~4CV(使用高浓度的有机溶剂时,为了避免产生气泡,应采用逐步增加有机溶剂浓度的方法),并立即用3CV 的水冲洗,5CV的平衡缓冲液平衡。
保存:4-30oC下20%乙醇中保存(4oC下有利于长期保存);层析柱中的介质可用20%的乙醇冲洗后保存于4-30oC。